Подготовка флуоресцентных антител или генетических маркеров, которые определяют активность гормонов и нейротрансмиттерных рецепторов, не только сложна, но и занимает много времени. В этой статье описывается полезная альтернатива, которая может быть использована для регистрации изменений физиологических реакций, вызванных связыванием агониста с его гомогенными рецепторами, многие из которых связаны с G - белком. Когда агонист связывается с рецептором, связанным с G - белком, он может вызвать ряд быстрых каскадных реакций, которые обычно приводят к мгновенному высвобождению ионов кальция из места внутриклеточного хранения. В прошлом в проточной цитологии мгновенные изменения концентрации ионов кальция в клетках ([Ca2 +] i) использовались для определения функциональной экспрессии рецепторов в подгруппах клеток [2], и здесь мы обнаружили, что новая система передачи образцов ползучести анализатора CytoFLEX особенно подходит для исследований ионов кальция на основе агонистов. Используя зеленый флуоресцентный кальциевый индикатор на основе эфиров ⸺Fluo - 4 AM (LifeTechnologies), можно измерить изменения в клетках HEK - 293 [Ca2 +] i в реакции на стимуляцию АТФ. Простое усовершенствование трубопроводов анализатора CytoFLEX, облегчающее доступ к пробным трубам с применением агонистов; Дальнейшие усовершенствования, которые были внесены в него, позволяют внедрить метод обнаружения « времени остановок». Используя анти - агонист в качестве физиологического критерия для наших экспериментов, мы в основном можем идентифицировать рецептор и окончательно доказать его функциональность. Исполнитель: Ira Schieren1 Peter Racanelli 2 Damian Williams 3
Принадлежащие подразделения: 1. Медицинский институт Говарда Хьюза, Медицинский центр Колумбийского университета. Beckman Coulter Inc., Miami, United States 3. Факультет патологии и клеточной биологии, Медицинский центр Колумбийского университета